发布日期：2025-01-04 16:15    点击次数：109

我正准备做青霉素致痫大鼠海马场电位方面的电生理 有没有做过场电位这方面的前辈？spiderman020389 wrote:请问各位，有哪位知道电极如何镀银？我5号电池接两根导线放在生理盐水中，但是总是镀不上，不知什么原因，请赐教。我们就是把不好用的电极拿出来，用砂纸打磨一下，直接泡到84消毒液里过夜就行了。多准备几根银丝替换一下。gaoxf wrote:我们就是把不好用的电极拿出来，用砂纸打磨一下，直接泡到84消毒液里过夜就行了。多准备几根银丝替换一下。请教这是什么原理？lovelonger wrote:请教这是什么原理？银丝被84消毒液中的氯离子氧化了。我们实验室也这样用，刚才我看了一下，主要成分是：sodium hypochloride把细胞养好不但可以做膜片钳，还可以做PCR或者免疫组化等，但要注意养细胞的时间，比如神经元细胞应在七八天左右，时间长细胞膜太老，时间短细胞膜太嫩，做膜片钳时膜易破！ 愿意与大家一起分享！！cJun1000 wrote:银丝被84消毒液中的氯离子氧化了。我们实验室也这样用，刚才我看了一下，主要成分是：sodium hypochloride对头！有白金丝就省事了，它不会在实验时被还原。chenzhiyong2008 wrote:把细胞养好不但可以做膜片钳，还可以做PCR或者免疫组化等，但要注意养细胞的时间，比如神经元细胞应在七八天左右，时间长细胞膜太老，时间短细胞膜太嫩，做膜片钳时膜易破！ 愿意与大家一起分享！！培养的时间长短会不会影响到膜离子通道的表达呢？chenzhiyong2008 wrote:把细胞养好不但可以做膜片钳，还可以做PCR或者免疫组化等，但要注意养细胞的时间，比如神经元细胞应在七八天左右，时间长细胞膜太老，时间短细胞膜太嫩，做膜片钳时膜易破！ 愿意与大家一起分享！！也不一定的喽。我做的急性试验，现切现做，基本上每天做两只老鼠，每只记录大约3各细胞。现在实验正在进行中......各位好：现有一事向各位咨询请教，因研究免疫细胞离子通道的需要，电极内液中需用到Cs+ Aspartate,我在网上搜索了很多网站，均没有得到这方面的信息。尽管有大量文献中称此购自Sigma公司，但该公司并无此试剂，请向哪位大侠知道何处可以买到，能提供给我一点点会令我感谢万分。补充一句，用此作电极内液的主要成分，主要是为了避免Cl-的影响，因为我记的是CRAC 通道电流。除此外，Cs+ Glutamate 或Cs+ Methanesulfonate 均可。先谢谢各位！我的信箱地址是：[email protected]终于找到组织了。我们实验室用的是EPC9的放大器。希望向大家多多学习。我的分数低，怎么才能下载single channel record这本书呀。我找了很久了，谁有能否给我发一个，我的e－mail是[email protected] 谢谢。从Axon网站上下载的pClamp 9.0安装软件是demo版的，只能在电脑上看，不能将分析的图拷出来，很不方便。我原有pClamp 8.0，但不能在windows XP上使用。有新买了膜片钳设备，带有pClamp 9.0非demo版安装盘的同仁，能否将该软件上传供大家享用。急需，多谢！我的e-mail：[email protected]我主要记录离体海马脑片场电位，细胞外记录，用的是浸没式浴槽，但是刺激伪迹很大，请问各位高手有什么方法可以减少刺激伪迹？谢谢！各位前辈，小弟初学patch，请教一个问题：我前一段时间一直在做电压钳，最近我想试试电流钳，主要目的是想看看给药前后，细胞静息膜电位有没有变化。我试了几次，每次所测得的膜电位都是0，加药后也没有什么变化。而文献上，报导的这种细胞的静息膜电位是－35mv左右。这会是什么原因呢？如何从电压钳模式向电流钳模式转变呢？我用的是axon200b的放大器，该如何操作？谢谢～～～jerryqiao ，我刚买过你要用的试剂，是从深圳市迈瑞尔化学技术有限公司买的，你试试。www.meryer.net请问哪位战友用的是Leica VT1000S振动切片机，用它来切脑片最佳的参数是多少？主要指振动幅度，振动频率，前进速度等。为何我的时候脑片老容易卷曲？请问哪位战友用的是Leica VT1000S振动切片机，用它来切脑片最佳的参数是多少？主要指振动幅度，振动频率，前进速度等。为何我的时候脑片老容易卷曲？我们现在用这一款震动幅度7-10 都可以， 前进速度1-3，刀片的角度1个孔到3个孔都用过，没有很大区别。 脑片的厚度是300-400我怎么没有看到你说的震动频率呢？你说的振动幅度实际上是振动频率，振动幅度一般有四个选择，0.2mm，0.4mm，0.6mm，1.0mm。难道是我的脑子冻的时间不够，不知道你一般冻多少时间？因为我切的是小脑脑片。glaciry wrote:我们实验室采用的是PowerLab8sp信号记录仪，放大器是AD公司的ML145双通道生物电放大器，目前做海马CA1区细胞外放电记录。没有你们说的那些仪器，我怎么才能测定我拉制的玻璃微电极的电阻呢？另外采集信号的时候总是有0.97的一个明显慢波存在，以致影响了整个图形的形状，是不是我的底线有问题。还有怎么才能确定我采集出来的脑深部细胞外放电是否良好呢？感觉采出来的信号乱乱的。谢谢不知你做的是在体的，还是离体的我以前做过在体的，介绍一下我的情况，你可以参考一下测试玻璃电极的电阻，我想你的AD放大器上就能够完成，你需要好好的看一下说明书，我们这里的放大器和你是一个厂家，但我不知道是不是完全一样的。简单的方法，用万用表测一下，我一般不用，一般尖端直径在1-2就可以了。当然阻抗要在3-15兆欧之间，不能太小，太大也不好。慢波我想是一个干扰，去除它很简单，通过滤波就可以做到，滤波范围300-3000。细胞放电，是一个一个的脉冲，只有几个毫秒的时程，如果有音频器监听的话，可以听到啪啪的声音，主要还是要通过神经元的放电频率来观察是否是你所测的神经元。海马CA1的放电频率，我测过，不像文献上报导的3-4hz之间，根据具体的情况而定了。主要是根据你的经验了，做的多了，也就能感觉出来，你是一个新手，定位很关键，事先要较正仪器，起初的工作很麻烦，但没有不行。地线连接有章法就可以。这个论坛上有很多的，你可以找一下。祝早日成功！spiderman020389 wrote:请问各位，有哪位知道电极如何镀银？我5号电池接两根导线放在生理盐水中，但是总是镀不上，不知什么原因，请赐教。要在饱和的NaCl溶液中才可。询问制作电极时挂绝缘漆如何才能挂的均匀。因为自己挂的时候上面总是不均匀，当稀释后挂的也不均匀，所以想请教大家怎样才能挂的均匀，厚度又不会增加很大。还有绝缘漆是用普通市面上的绝缘漆还是漆包线绝缘漆？非常感谢～！！kaitanzhe wrote:不知你做的是在体的，还是离体的我以前做过在体的，介绍一下我的情况，你可以参考一下测试玻璃电极的电阻，我想你的AD放大器上就能够完成，你需要好好的看一下说明书，我们这里的放大器和你是一个厂家，但我不知道是不是完全一样的。简单的方法，用万用表测一下，我一般不用，一般尖端直径在1-2就可以了。当然阻抗要在3-15兆欧之间，不能太小，太大也不好。慢波我想是一个干扰，去除它很简单，通过滤波就可以做到，滤波范围300-3000。细胞放电，是一个一个的脉冲，只有几个毫秒的时程，如果有音频器监听的话，可以听到啪啪的声音，主要还是要通过神经元的放电频率来观察是否是你所测的神经元。海马CA1的放电频率，我测过，不像文献上报导的3-4hz之间，根据具体的情况而定了。主要是根据你的经验了，做的多了，也就能感觉出来，你是一个新手，定位很关键，事先要较正仪器，起初的工作很麻烦，但没有不行。地线连接有章法就可以。这个论坛上有很多的，你可以找一下。祝早日成功！谢谢你的帮助，请问你的放大器是不是AM3000Ｈ？我最近在做加药对钾电流的影响，给予－130－＋70mv的ramp后，出现了下面的结果图（已经重叠）。请各位大侠帮我分析分析。[img][/img]绿色的是对照，红色的是给药后的，黑色的wash后的。 screen.width-333)this.width=screen.width-333" width=306 height=267 title="Click to view full 未标题-1 拷贝.jpg (306 X 267)" border=0 align=absmiddle>膜片钳记录过程中对细胞有不同程度的刺激，一段时间后电流同最开始比有一定的小程度的变化。绿色代表对照，红色为给药，说明药物对该电流的峰值有影响，而停药后的黑色电流大于红色说明经过wash后通道电流有一定的恢复，只是没有恢复到对照组而已。我觉得这样的情况是正常的。可以理解为：经过若干次刺激后细胞或膜通道的状态有所下降，所以没有恢复到原有的程度。属个人之见。jerryqiao wrote:各位好：现有一事向各位咨询请教，因研究免疫细胞离子通道的需要，电极内液中需用到Cs+ Aspartate,我在网上搜索了很多网站，均没有得到这方面的信息。尽管有大量文献中称此购自Sigma公司，但该公司并无此试剂，请向哪位大侠知道何处可以买到，能提供给我一点点会令我感谢万分。补充一句，用此作电极内液的主要成分，主要是为了避免Cl-的影响，因为我记的是CRAC 通道电流。除此外，Cs+ Glutamate 或Cs+ Methanesulfonate 均可。先谢谢各位！我的信箱地址是：[email protected]+ Methanesulfonate（甲磺酸铯）可以从SIGMA购买到。Cesium methanesulfonate  分子量228  sigma编号C1426  5g  47美元  可配制电极内液150ml。CS作用主要是阻断钾通道电流。methanesulfonate或其他葡萄糖酸根、硫酸根替代氯离子的目的是避免氯离子影响。上面那张红红绿绿的图黑色的部分是不是因为你的药没有wash 干净呢？有些药物非常得难以洗净的。请教几个很弱的问题，1、95％氧气＋5％二氧化碳混合气的作用是什么？2、为什么不能用纯氧代替？3、给脑积液充混合气后，pH值如何变化？是不是应该在充氧后再调节pH值？非常感谢！回答physolar 问题：1、因为脑脊液内含有NaHCO3，所以必须通入5%CO2，在脑脊液内形成HCO3-/H2CO3缓冲体系，维持PH值稳定。2、刚配制的脑脊液PH值约为7.8，充混合气后PH为7.4。一般而言，不需要调节PH值，如PH值不对，应考虑所用的试剂是否过期，可以更换试剂。1、95％氧气＋5％二氧化碳混合气的作用是什么？2、为什么不能用纯氧代替？3、给脑积液充混合气后，pH值如何变化？是不是应该在充氧后再调节pH值？答：1.氧气是脑组织必须的，二氧化碳是维持acsf的ph稳定。之所以用这一浓度比，主要是模拟在体环境，另外在这个浓度比下，细胞的活力可以达到最大。 2.如果用纯氧，那acsf的ph将不能保持稳定。3.刚配完的acsf，其ph大概在7.8左右，通入混合气后，一般ph会降低，并维持在7.35~7.45之间。一般不需要调节ph，因为液体本身形成了缓冲对。如果通气后液体ph不能维持在7.4左右，那要适当调节NaHCO3的浓度。一般范围在18~26mmol/L之间。如果气体质量不行，那液体的ph也很难维持在7.4左右，我们就遇到了这样的问题，发现ph总是偏高。treesea wrote:我最近在做加药对钾电流的影响，给予－130－＋70mv的ramp后，出现了下面的结果图（已经重叠）。请各位大侠帮我分析分析。[img][/img]绿色的是对照，红色的是给药后的，黑色的wash后的。有没有做过阶跃刺激？看你的图钾通道给药后抑制了一些，洗脱后略有恢复。只是通道激活的电压发生了改变，图略有左移。应该看看稳态激活曲线有没有改变。另外，可以采用某个电压长时间记录，观察对电流的直接改变。不知哪位用的切片机也是Leica VT1000S的，我切脑片时总是很容易卷曲。我设置的参数时振动频率8，振动幅度0.4mm，速度1－2，角度5度。脑组织一般冻3min左右。用的刀片都时一次性的。请帮忙看看我的问题可能出在哪？physolar wrote:请教几个很弱的问题，1、95％氧气＋5％二氧化碳混合气的作用是什么？2、为什么不能用纯氧代替？3、给脑积液充混合气后，pH值如何变化？是不是应该在充氧后再调节pH值？非常感谢！1.人工脑脊液的缓冲系是由碳酸氢盐形成的，所以二氧化碳的作用就是维持其pH稳定在7.4。2.一般配置好人工脑脊液后都先用混合气或二氧化碳气饱和，再以氢氧化钠调pH到7.4，以混合气维持。3.国内很多地方配置的混合气并不合格，二氧化碳的浓度常达不到5%。因为二氧化碳装罐是液体，而氧气是气态，二者混合不太容易，所以常见到的情况是，混合气用一段时间后就很难把pH控制在7.4，往往偏碱。4.另外一种办法是以纯的食用二氧化碳和纯氧分别通入人工脑脊液中。只是二氧化碳的通气量要很小，稍微大些就偏酸，过小就偏碱，需多次练习才能较好控制。我最近在做海马CA1区的场电位，结果一直不太好。请问国内哪里做得比较好，最好是用浸没式记录槽记录的，因为我们用的是这种方法。请教zhyucn 室温下，我配置的acsf通混合气后其ph确实只有7.2左右，但我发现acsf预热后其ph会上升，是不是也要先用氢氧化钠调节至7.4，那不是更高了吗？因为我的脑片一直活性不好，找不到原因。谢谢！Who can send the copy of pclamp software? The pclamp 9.0 is prefered. Please.Zhenjia